National Reference Laboratory for Dourine

Dourine is a chronic or acute contagious venereal disease of solipeds. The causative agent, Trypanosoma (T.) equiperdum (Doflein 1901) is transmitted directly from animal to animal during coitus. Humans are not susceptible to T. equiperdum infections.

Trypanosoma (T.) equiperdum

T. equiperdum is a protozoal, extracellular hemoflagellate (16-35µm of length) belonging to the family of trypanosomatidae, order of kinetoplastidae, parasitizing primarily in the tissue, invading the blood vessels only temporarily. According to the mode of transmission two sections are distinguished, one of which, the section of Salivaria, contains the subgenus Trypanozoon, including the species T. equiperdum, T. evansi and T. brucei. Recent molecular studies revealed that T. equiperdum and T. evansi may not be independent species, but rather types or subspecies of T. brucei, specifically adapted to solipeds. Up to now, T. equiperdum and T. evansi, both of which can be found in horses, cannot be differentiated by other means than PCR. T. equiperdum differs from other members of the subgenus Trypanozoon in that it is not transmitted by an invertebrate vector organism, but by coitus directly from animal to animal. A reservoir of the pathogen other than infected equine animals is not known.

Significance of T. eqiperdum as infectious agent

In the past dourine was present in many countries worldwide, nowadays it is eradicated in Central Europe, North America and Australia. In the beginning the disease manifests itself in a local inflammation of the genitalia with mucous excretions followed by oedematous cutaneous plaques at the neck, shoulder, breast and croup. Later motor nerve paralysis occurs. Clinical disease does not occur in Germany anymore. Here, horses in most cases are noticed by inconclusive or weakly positive serological reactions at trading or breeding examinations. Often these horses are imported from risk areas. A positive serological reaction has serious consequences for the animal (life, breeding) and the owner (financially) since the direct detection of the pathogen or of specific DNA in a country without endemic infections is unsuccessful in most cases.

In Germany dourine is a notifiable animal disease. The official diagnosis is conducted by complement fixation test (CFT), the method recommended by the OIE (world organization of animal health). According to OIE Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines 2008 serum titers equal or more than 1: 5 (serum dilution) 2+ are regarded as positive. According to EU commission decision 93/197/EWG (26/02/1996) serum titers from 1:10 (serum dilution) are regarded as positive for dourine.

The NRL produces the antigen used for CFT which is distributed to the veterinary public health institutes in Germany, as approved antigen is not commercially available in Germany. Furthermore, the NRL re-examines positive and inconclusive serological findings obtained by veterinary public health institutes and organizes inter-laboratory diagnostic trials.

  • Confirmatory CFT testing of positive or inconclusive results obtained by veterinary public health institutes (according to OIE)
  • Production of officially approved CFT antigen by propagation of trypanosomes in rats (according to OIE)
  • Application of additonal serological methods

In vitro-Herstellung von Trypanosoma equiperdum-Antigen und dessen Bewertung zur Verwendung bei der Serodiagnostik der Beschälseuche

Um einen Ersatz für das herkömmliche Herstellungsverfahren von Antigenen für die Beschälseuche-Diagnostik in Ratten zu schaffen, wurde ein zellfreies in vitro-System zur Vermehrung des Trypanosoma equiperdum-Stammes OVI entwickelt. Basierend auf dem partiell definierten Medium nach Baltz et al. (1985) wurde ein optimiertes Medium durch Zugabe weiterer Nährstoffe hergestellt. An dieses Medium wurden Trypanosomen durch zwei aufeinanderfolgende Kultivierungsschritte adaptiert, was zu einer signifikant besseren Vermehrung bzw. einer erhöhten Zelldichte-Toleranz führte. Infolgedessen konnten angepasste Parasiten auf maximale Zelldichten von > 2 x 106 Zellen/ml vermehrt werden, was eine in präparativen Mengen mit dem herkömmlichen Verfahren vergleichbare in vitro-Antigenproduktion ermöglicht. Eine Kollektion von 180 Pferde-Seren aus dem Feld, die zuvor zur Untersuchung an das Deutsche Nationale Referenzlabor für Beschälseuche geschickt worden waren, wurden in der Komplement-Bindungsreaktion (KBR) sowohl unter Verwendung von in vitro- als auch herkömmlich hergestelltem Beschälseuche-Antigen getestet. Cohens Kappa-Werte der Resultate mit 2 in vitro-hergestellten Antigen-Chargen betrugen im Vergleich zu herkömmlichem Antigen 0,91 (95% Konfidenzintervall [CI]: 82,2-99,7) bzw. 0,83 (95% CI: 70,3-95,3). Die Eignung von Antigenen für diagnostische Zwecke wurde in einer Laborvergleichsstudie, bei der 14 Seren von Pferden mit festgestelltem Beschälseuchestatus eingesetzt waren, bestimmt. KBR-Ergebnisse von 15 teilnehmenden europäischen Labors zeigten eine diagnostische Sensitivität von 94,1% (95% CI: 89,4-98,7) und eine diagnostische Spezifität von 96,2% (95% CI: 92,5-99,9) für herkömmliches Antigen und eine etwas höhere diagnostische Sensitivität von 96,0% (95% CI: 92,2-99,8) und eine diagnostische Spezifität von 97,1% (95% CI: 94,0-100) für in vitro-hergestelltes Antigen. Wir schließen daraus, dass unser neuartiger Ansatz für die Herstellung von Beschälseuche-Antigen aus in vitro-gewachsenen Trypanosomen quantitativ und qualitativ die zukünftige Anforderungen erfüllt und von den zuständigen Behörden als Alternative für den derzeit als internationalen Standard vorgeschriebenen Tierversuch in Betracht gezogen werden sollte.

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Bassarak, B., Moser, I., Menge, C. (2016) In vitro production of Trypanosoma equiperdum antigen and its evaluation for use in serodiagnosis of dourine. Veterinary Parasitology 223:133-40
DOI: 10.1016/j.vetpar.2016.04.032 

Kontakt: Irmgard Moser: irmgard.moserflide; Christian Menge: christian.mengeflide

  • International recommendations on transport of dangerous goods
  • Serum samples, at least 1 ml, cool or frozen
  • Accompanying letter including name and address of submitting institution (letter head), signature of the sender, animal species, description of sample, sample number